Xterra色譜柱的啟用（安裝、平衡和柱效測試）

  每一根XTerra?色譜柱都有柱性能測試報告Performance Test Chromatogram 和所用填料的分析報告Certificate of Analysis，填料的分析報告儲存在色譜柱包裝盒內的技術信息CD上，是所用填料的批次分析報告，其中包括填料的批號、填料顆粒鍵合前和鍵合后的分析數據、測試結果和所用的測試條件;性能測試報告是針對每根色譜柱的測試報告，包括以下信息:填料批號、色譜柱序列號，USP塔板數、拖尾因子，容量因子以及所用的測試條件。用戶應該儲存這些信息以便在將來做參考。

a.色譜柱的安裝

  提示:以下的流速適用于4.6mm內徑，粒徑為5μm的色譜柱，請根據色譜柱內徑、長度、填料粒徑以及壓力適當地對流速進行調節。請參考第三節了解如何根據色譜柱的規格調整流速，參考第五節了解有關HPLC系統連接的更多信息。

1.沖洗含有任何緩沖鹽的泵系統，將色譜柱入口端連接到進樣器的出口端，色譜柱上的箭頭標明了流動相的流向(先不要接檢測器)。

2.在0.1mVmin流速條件下用100%甲醇或乙腈沖洗色譜柱，然后在5分鐘內將流速升至0.5ml/min。

3.當溶液均勻地從柱子出口流出時，停掉流速，將色譜柱出口端接到檢測器上(這樣操作可以避免氣泡進入檢測系統，并且可快速達到基線平衡)。

4.按照步驟2的方法逐漸提高流速。

5.一旦壓力達到穩定值并且基線平衡好后，則進入下一步操作。

說明:如果流動相中含有低濃度的流動相改性劑如離子對試劑，要達到完全平衡可能需要100倍甚至200倍柱體積的流動相:此外，對于含有甲酸或甲

b.色譜柱平衡

  XTerra?色譜柱是用100%乙腈保存的，在使用其它的流動相系統前一定要確保流動相和色譜柱內溶劑的“相容性”。至少用10倍柱體積的流動相平衡色譜柱(見表1中不同規格色譜柱的柱體積數值)。

為了避免流動相中的緩沖鹽在色譜柱或系統中析出，在換上流動相之前，需要用5倍柱體積的水與有機溶劑的混合溶液(將緩沖溶液用水替代，要求有機溶劑的含量比流動相中的含量略低或相等，如在使用60/40的甲醇/緩沖鹽流動相之前先用5倍柱體積的60/40甲醇/水溶液沖洗色譜柱)。

c. 測試色譜柱的柱效

1. 在開始使用色譜柱分析樣品前先測量色譜柱的柱效，沃特世建議選用合適的待測物測試柱效，如采用色譜柱性能測試報告中的樣品和條件[加入柱效測試條件]。

2.計算塔板數，用這個數據作為對照，定期監控色譜柱的柱效。

3.隨著色譜柱的使用，需要定期作同樣的測試以便追蹤色譜柱的性能變化，由于不同儀器的管路連接、操作環境、系統電路、所使用的溶劑和試劑的質量、色譜柱條件以及操作者的技術都有可能不同，因此在不同的HPLC系統上測試的結果可能會有一些差別。